志贺菌rfbA基因突变体的构建

作者： 宋丽 [1,2] ; 牛畅 [2] ; 白国旺 [2] ; 冯尔玲 [2] ; 刘先凯 [2] ; 魏华 [1] ; 王恒樑 [2] ; 熊勇华 [1] ; 朱力 [2]

摘要：目的构建弗氏2a志贺菌301 rfbA基因缺失突变株,初步探究志贺菌脂多糖合成与糖蛋白合成通路是否相关。方法首先用PCR扩增出rfbA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对rfbA基因进行缺失,用PCR进行初步验证,然后通过LPS的银染方法进行进一步验证。随后,制备野生株、rfbA缺失突变株的全菌蛋白样品,进行双向电泳后比较野生株301和rfbA缺失株的蛋白表达谱。结果成功构建了301 rfbA缺失突变株。在LPS的银染实验中,rfbA突变株在凝胶中未形成一长串的梯状条带。在双向电泳实验中,野生株和突变株没有明显的蛋白差异点。结论获得了301 rfbA基因缺失突变体,初步认为志贺菌中不存在与脂多糖O-抗原合成相关的蛋白糖基化途径。

关键字： 志贺菌属 志贺菌   弗氏 脂多糖类 基因缺失 突变    

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