弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试

作者：李月玥 [1,2] ; 刘先凯 [2] ; 冯尔玲 [2] ; 王恒樑 [1,2] ; 陈福生 [1] ; 朱力 [2]

摘要：目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记（SILAC）技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析。结果成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu。结论本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析。

关键字：志贺菌弗氏赖氨酸营养缺陷型突变株基因缺失 λ-Red重组系统双向电泳 SILAC

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