LTB4-BLT2信号通路对小鼠树突状细胞功能的影响
作者： 马聪 [1,2] ; 刘永霞 [3] ; 韩春光 [2] ; 刘永学 [2]
摘要：目的研究外源性白三烯B4（LTB4）刺激条件下对小鼠体外诱导培养的树突状细胞（DCs）趋化功能的作用及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）两种细胞因子表达及分泌量的影响,利用其受体BLT2通路探究其作用机制。方法体外原代培养小鼠骨髓来源单个核细胞,添加粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）诱导为DCs,磷酸脂多糖（LPS）体外刺激其成熟,分析DCs表面因子的表达;利用小干扰RNA（siRNA）阻断LTB4-BLT2通路后RT-PCR分析BLT2基因水平抑制情况;外源性LTB4刺激阻断通路的细胞,Tran-swell趋化小室结合噻唑蓝（MTT）法分析对其趋化功能的影响;ELISA检测不同条件对细胞TNF-α、IL-1β分泌量的影响,RT-PCR分析其基因水平表达的影响。结果体外诱导并刺激成熟的DCs高表达MHC-Ⅱ、CD11c、CD86。利用DNA干扰（RNAi）技术能够成功阻断LTB4-BLT2通路。外源性LTB4分别作用于正常表达和阻断BLT2通路的细胞,可明显促进BLT2正常表达DCs的趋化（P〈0.05）,且与剂量成正比。阻断通路的细胞趋化作用明显被抑制甚至消失（P〈0.05）;阻断通路的DCs在外源性LTB4刺激下,细胞TNF-α、IL-1β两种因子分泌量较之对照组明显降低（P〈0.05）,同时,这两种细胞因子在基因水平上的表达也明显下调。结论 LTB4刺激的DCs,其BLT2通路明显介入其趋化,同时,DCs分泌细胞因子的功能也与LTB4-BLT2通路相关。抑制BLT2基因表达,DCs的趋化移行作用和致炎因子的分泌功能均受到抑制,深入了解其机制可能为研究炎症有关药物提供新靶点。
关键字： 白三烯B4 树突状细胞 BLT2 趋化 TNF-α IL-1β