肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立

作者：高钰双 [1] ; 冯甜 [1] ; 邱景富 [1] ; 杨瑞馥 [2] ; 周冬生 [2] ; 李迎丽 [1]

摘要：目的建立可行的肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株。结果与结论成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留。该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术。

关键字：克雷伯菌肺炎 cAMP受体蛋白基因敲除自杀载体同源重组

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