靶向FHL1的microRNA初步筛选研究

作者：王瑜 [1,2] ; 付洁 [2] ; 程龙 [3] ; 徐小洁 [3] ; 宋海峰 [2] ; 叶棋浓 [3]

摘要：目的构建含有FHL1基因3＇-UTR区的荧光素酶报告基因载体,用以检测与其相互作用的microRNA（miRNA）。方法 PCR扩增出FHL1基因3＇-UTR区片段,插入到经过改造的荧光素酶报告基因载体pcDNA 3.0中;利用Target Scan5.1软件预测可能与FHL1基因3＇UTR区相互作用的miRNA,将miRNA与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中,检测其荧光活性;构建针对荧光活性结果变化明显的miRNA的种子区缺失突变体,检测荧光活性。结果测序结果表明,含有FHL1基因3＇-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确;荧光素酶活性实验表明,与对照组相比,miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40%左右,并构建上述miRNA缺失突变体,miR-200c使荧光素酶活性回复。结论成功构建了FHL1基因3＇UTR区的荧光素酶报告基因载体,而miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可以抑制其荧光素酶活性,其中miR-200c可能直接作用于FHL1基因3＇-UTR区。

关键字： FHL1基因荧光素酶报告基因转录活性 3 -UTR区 microRNA

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