基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用

作者：高招刚 [1] ; 邵勇 [2] ; 高丽华 [2] ; 潘芸 [1] ; 刘羽 [2] ; 李伊培 [3] ; 胡显文 [2] ; 陈惠鹏 [2]

摘要：目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变，构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B，通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子，加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志，再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切，插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子，构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中，通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志，并加入hCMV启动子，人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现，重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选，得到高效表达目的蛋白载体系统，为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。

关键字：谷氨酰胺合成酶甲氨喋呤蛋氨酸亚氨基代砜巨细胞病毒高效表达细胞系重组蛋白

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