MERS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达和纯化

作者：付洋波 ; 胡勇 ; 黄成成 ; 白圆圆 ; 邱立红 ; 曹诚 ; 高婷

摘要：目的构建带有MERS-Co V N（MERS冠状病毒核衣壳蛋白）基因片段的p ET-22b＋原核表达载体,并表达和纯化核衣壳蛋白（NP）。方法通过PCR技术扩增NP蛋白基因片段,插入到原核表达载体p ET-22b＋上。使用核酸电泳、测序以及小量诱导表达确认所构建克隆的正确性,然后将重组质粒转化进大肠杆菌BL21a（DE3）中,并在大肠杆菌BL21a（DE3）中大规模诱导表达NP蛋白,使用AKTA纯化系统经强阳离子交换层析纯化出NP蛋白。结果测序和小量诱导结果表明,扩增的NP蛋白片段序列正确,所构建的p ET-22b＋-NP克隆可在大肠杆菌BL21a（DE3）的包涵体和细胞质中表达;通过阳离子交换层析和浓缩后,蛋白的纯度和浓度都得到明显提高。结论纯化出高纯度、高浓度的NP蛋白,为NP蛋白功能性研究提供重要基础。

关键字：冠状病毒属 MERS-Co V N 原核表达纯化阳离子交换层析

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