期刊简介
西尼罗病毒RNA复制子系统的建立与应用
作者： 张富军 [1] ; 李晓峰 [2] ; 曹飞 [2] ; 赵慧 [2] ; 邓永强 [2] ; 朱舜亚 [2] ; 姜涛 [2] ; 秦鄂德 [2] ; 秦成峰 [2]
摘要：目的构建具有复制和表达活性的RNA形式的西尼罗病毒（WNV）复制子。方法在DNA形式的WNV复制子pWNrep的基础上，将其CMV启动子替换成SP6启动子，并在3’UTR端引入PacI酶切位点，构建复制子克隆pSP6-WNrep。同时，将增强型绿色荧光蛋白（eGFP）和海肾荧光素酶（R．luc）报告基因分别插入上述复制子质粒中，获得含有报告基因的复制子pSP6-WNrep／eGFP和pSP6-WNrep／R．luc。将上述克隆线性化后进行体外转录，将转录体RNA转染BHK．21细胞，观察不同时间点绿色荧光蛋白（GFP）的活性和R．luc活性。结果与结论获得了WNV复制子pSP6-WNrep、pSP6-WNrep／eGFP和pSP6-WNrep／R．luc，酶切和测序鉴定结果显示，序列与预期一致。将含有报告基因的复制子转染细胞72h后仍能观察到荧光信号，R．luc的活性随时间延长而增强。本研究成功构建了WNVChin-01株的RNA复制子，该复制子能够在哺乳动物细胞中有效复制并表达外源蛋白，为下一步构建WNV单轮感染病毒样颗粒奠定了基础。
关键字： RNA 西尼罗病毒 复制子 转染