期刊简介
重组人B细胞激活因子融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定
作者： 王茹 [1,2] ; 林周 [1] ; 魏化伟 [1] ; 彭辉 [1] ; 侯春梅 [1] ; 冯健男 [1] ; 沈倍奋 [1] ; 黎燕 [1]
摘要：目的获得人类B细胞激活因子（Bcell activating factor，BAFF）胞外段融合蛋白并对其生物活性进行分析。方法构建pET32a／BAFF的原核表达载体，进行原核表达、亲和纯化，并通过SDS-PAGE、Western印迹进行鉴定。利用非还原电泳后的Western印迹与HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式。ELISA、OctetRED系统检测rhBAFF结合受体TACI的能力并做出实时动力学分析。M佟法检测rhBAFF促进B细胞增殖的活性。结果融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达，经Ni—NTA纯化获得的目的蛋白纯度超过90％；SDS-PAGE、Western印迹显示在相对分子质量为36×10^3位置有目的蛋白的特异条带；非还原电泳及HPLC分析表明，重组蛋白以三聚体的形式存在；ELISA、OctetRED系统同时证实BAFF可与受体TACI结合；增殖实验证实重组蛋白具有生物学活性。结论成功获得纯度超过90％的rhBAFF可溶蛋白，实验证实为具有生物学活性的三聚体结构。
关键字： B细胞激活因子 受体 三聚体 相互作用 细胞增殖 表达纯化