慢病毒介导的敲低UBC9表达抑制ERβ类泛素化修饰水平

作者：李玮妮 ; 陈立涵 ; 程龙 ; 徐小洁 ; 付洁 ; 关鑫 ; 刘婕 ; 张浩 ; 叶棋浓

摘要：目的建立稳定敲低UBC9蛋白表达的293T细胞株,检测其对雌激素受体β（ERβ）类泛素化修饰水平的调节作用。方法构建4条针对人UBC9基因的慢病毒短发夹RNA（shRNA）的干扰载体,将其与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞后,收集病毒上清,感染293T细胞,经嘌呤霉素（puromycin）筛选后获得稳定表达慢病毒介导UBC9 shRNA的混合细胞集落,分别用实时（real-time）PCR和Western印迹方法检测UBC9的表达情况,瞬时转染方法检测UBC9表达水平对ERβ类泛素化修饰水平的影响。结果建立了稳定敲低UBC9的293T细胞株,UBC9降低能够抑制ERβ类泛素化修饰水平。结论 UBC9在ERβ类泛素化修饰反应中发挥重要作用。

关键字：慢病毒属 UBC9 ERβ 类泛素化修饰 RNA干扰

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